Toto mistrovské dílo Caravaggia zobrazuje okamžik, kdy Ježíš pobízí Matouše, aby ho následoval. Caravaggio ho namaloval pro římský kostel San Luigi dei Francesi, kde zůstal dodnes a visí vedle dvou dalších Caravaggiových obrazů Matouše: Umučení svatého Matouše a svatý Matouš a Anděl. Všechny tři byly dokončeny v letech 1599 až 1602 jako související zakázky, neboť se zdá, že na nich Caravaggio pracoval současně.
Obraz líčí příběh z Matoušova evangelia 9: 9: „Když šel Ježíš odtud dál, viděl v celnici sedět člověka jménem Matouš a řekl mu: „Pojď za mnou!“ On vstal a šel za ním." Caravaggio zobrazuje výběrčího daní Matouše sedícího u stolu s dalšími čtyřmi muži. Ježíš Kristus a Svatý Petr vstupují do místnosti a Ježíš ukazuje na Matouše. Paprsek světla ozařuje tváře mužů u stolu, kteří se dívají na Ježíše.
Poněkud překvapivé je, že se stále diskutuje o tom, který z mužů u stolu je svatý Matouš. Gesto ruky vousatého muže u stolu lze vyložit dvěma způsoby: (a) vousatý muž je Matouš, který se ptá „Kdo, já ?!“ a ukazuje na sebe, nebo (b) vousatý muž ukazuje na mladíka na konci stolu, shrbeného jak počítá peníze, tak jak to výběrčí daní dělávají, a vousatý muž se ptá: „Kdo, on ?! " Ať tak či onak, vousatý muž vypadá, že má pochyby.
Většina učenců podporuje možnost (a) s vousatým mužem a jejich názory jsou silně podporovány skutečností, že svatý Matouš na dvou dalších obrazech, které visí hned vedle, se zdají být založeny na stejném modelu „vousatého muže“, ačkoli ho Caravaggio na těch dalších udělal staršího. Možnost (b) je novější návrh, kde údajně obraz ukazuje okamžik bezprostředně před tím, než mladý Matouš zvedne hlavu, aby viděl Krista. Ostatní, ti nerozhodní, se přiklonili k možnosti (c), která viní samotného umělce a nazývají obraz „záměrně nejednoznačným“.
Dalším fascinujícím výjevem na obraze je Ježíšova ruka. Je to téměř dokonalý zrcadlový obraz Adamovy ruky natahující se k Bohu, jak ji namaloval Michelangelo. Caravaggiův styl byl jistým a rozhodujícím posunem od Michelangelova idealismu, kde každý vždy vypadal perfektně. Místo toho Caravaggio líčil, to co viděl a jak to viděl. Jeho šerosvit byl navíc tak silný a mocný, že dostal své vlastní jméno: tenebrismus. Jeho vliv můžete v moderní kinematografii vidět všude, protože režiséři vědí, jakou sílu má tento druh kontrastního obrazu na diváky. Právě tato kombinace intelektuální síly a umělecké zdatnosti činí Caravaggiova díla tak populární již více než 400 let.